GT1-7 hücre hattında muskarinik reseptörlerin uyarımı ve blokajının GnRH ile nöronal faktörlerin ekspresyona etkisi

Abstract

Gonadotropin salgılatıcı hormon, hipotalamusta GnRH nöronlarından sentezlenen ve salınan tropik bir peptit olup ön hipofizden folikül uyarıcı hormon ve lüteinizan hormonun salınmasından sorumlu olan bir hormondur. GnRH salınımından sorumlu hücrelerin kolinerjik reseptörleri ifade ettiğini gösteren çok az sayıda çalışma vardır. Reseptörlerin uyarılması veya bloke edilmesi sonucu nöranal faktörlerin mRNA ekspresyonlarının seviyeleri ile GnRH salınımın nasıl etkilendiği üzerine çalışmalar yetersizdir. Ayrıca literatürde kolinerjik reseptör aktivatörü asetilkolin ve kolinerjik reseptör blokörü atropin etkisindeki hücrelere MTT testi ile ilgili bir çalışma bulunmamaktadır. Bu çalışmada GT1-7 hücre hattından elde edilen hücrelerde, kolinerjik reseptör aktivatörü asetilkolin ve kolinerjik reseptör blokörü atropin etkisindeki farklılaşmada oluşan ekspresyon değişikliklerini saptamak için gruplar oluşturularak çalışmalar yapıldı. Çalışmanın başında öncelikle aktivatör ve blokör dozlarının belirlenmesi ve proliferasyon etkisinin ölçülmesi amacıyla 2.pasaj sonunda elde edilen hücrelerle MTT testi analizi yapıldı. Daha sonra hücrelerden RNA ekstraksiyonu ve cDNA sentezi yapıldı. Atropin ve asetilkolin etkisindeki hücrelere, NGF, Nestin, B-3 tübilin, GDNF B-Actin nöronal faktör primerleri eklenerek mRNA ekspresyonları RT-qPCR ile gösterildi. ACh’nin artan konsantrasyonlarda nöranal faktörlerin mRNA ekspresyonlarının artışına ve bununla beraber GnRH artışına neden olduğu göstermektedir. Elde ettiğimiz sonuçlar GnRH salınımının özellikle kolinerjik reseptörlerin uyarımıyla artış yaptığını fakat bununla beraber bu artışın nöronal faktörlerin artışına da bağlı olduğu göstermektedir. Nöronal faktörlerin ekspresyonlarında da kolinerjik reseptörlerin uyarılmasının etkisi mevcuttur. Aksine blokaj etkisi ne nöronal faktörler ne de GnRH salınımı üzerine belirgin bir etkiye sahip değildi. Bu durum kolinerjik reseptör uyarımı dışında başka faktörlerin de birlikte hareket ettiğini işaret etmektedir.

Gonadotropin-releasing hormone (GnRH) is a tropic peptide synthesized and released from GnRH neurons in the hypothalamus and is responsible for the release of follicle-stimulating hormone and luteinizing hormone from the anterior pituitary. Very few studies show that cells responsible for GnRH release express cholinergic receptors. Studies on the levels of mRNA expression of neuronal factors and how GnRH release is affected by stimulation or blocking receptors are insufficient. In addition, there is no study on the effects of acetylcholine (ACh) and atropine (ATR) on these cells. Therefore, our study aimed to analyze the effects of stimulation and blockade of cholinergic receptors on neuronal factors and GnRH expression in GT1-7 cells. In our study, the effects of ACh and ATR at increasing concentrations were analyzed with the MTT test. The cells were exposed to 1-10-100 µM concentrations of ACh and ATR to determine the effects on neuronal factors and GnRH expressions. The changes in NGF, Nestin, β-tubulin III, and GDNF mRNA expressions in these cells were determined by RT-qPCR using RNA samples obtained from these cells. GT1-7 cells continued their proliferation at high concentrations of ACh, such as 10-1 M. In ATR exposure, the proliferation of cells decreased after a concentration of 10-3 M. In general, increasing concentrations of ACh resulted in increased expression of neuronal factors and accompanying GnRH mRNA. ATR, on the other hand, showed no significant effects on neither neuronal factors nor GnRH mRNA expressions. The increase with ACh indicates the activity of the cholinergic system in the GnRH release, but the mechanism of the increase in neuronal factors seems more complex. It seems likely that neuronal factors indirectly increase GnRH expression by receptor stimulation.