Hidrojen peroksit ile okdisatif stresin indüklendiği BEAS-2B hücrelerinde myrtus communis L. esansiyel yağının antioksidan etkilerinin araştırılması

Abstract

Amaç: Bu çalıs?mada, Myrtus communis L. esansiyel yag?ının, in vitro olarak hidrojen peroksit ile oksidatif strese ug?ratılmıs? insan brons?iyal epitel hücre hattında (BEAS-2B) antioksidan etkilerinin olup olmadıg?ı ve apoptotik yolaklar üzerindeki etkileri aras?tırılmıs?tır. Materyal ve Metod: BEAS-2B hücrelerinde H2O2 ile M. communis L. esansiyel yağının uygun dozlarının belirlenmesinde MTT yöntemi kullanılmıştır. Oksidatif stres oluşumu MDA düzeyi ölçülerek belirlenmiştir. Hücreler; oksidatif strese maruz bırakılan grup (H2O2), tedavili grup (H2O2+M. communis L) ve kontrol grubu olmak üzere üç gruba ayrılmıştır. Her üç grupta MDA düzeyleri ölçülmüş ve apoptotik etkilerin saptanması amacıyla Kaspaz 3, Kaspaz 8, Kaspaz 9 ile p21 genlerinin ekspresyon düzeyleri RT-PCR yöntemi ile saptanmıştır. Bulgular: MTT testi ile uygun dozlar H2O2 için 40 ?M, M. communis L. yağı için 15.625 ?g/ml olarak saptanmıştır. Sag?lıklı hücre grubuyla kars?ılas?tırıldıg?ında, 40 ?M H2O2 maruziyeti uygulanan grupta MDA düzeyinde anlamlı artıs? gözlenirken (p=0,0005), M. communis L. esansiyel yag?ı ile tedavi edilen gruptaki MDA düzeyi kontrol grubu ile benzer düzeyde (p>0.05) bulunmus?tur. 40 ?M H2O2 uygulanan hücrelerde Kaspaz 3, Kaspaz 8 ve p21 genlerinin ekspresyon seviyelerinin sag?lıklı hücre grubuna göre anlamlı bir s?ekilde arttıg?ı (sırasıyla p=0.001, p=0.017 ve p=0,0003), Kaspaz 9 gen ekspresyon seviyesinin deg?is?medig?i (p=0.8) saptanmıs?tır. M. communis L. yag?ı ile tedavi edilen hücrelerde, oksidatif stres modelinin olus?turuldug?u gruba göre Kaspaz 3 gen ekspresyon seviyesinin anlamlı s?ekilde azaldıg?ı saptanmıs?tır (p=0.00007). Sonuç: Çalıs?mamızda, M. communis L. esansiyel yag?ının MDA seviyesini güçlü s?ekilde azaltıcı etkisi oldug?u, ayrıca apopitozu durdurucu bir etki göstererek, teröpatik ajan olarak potansiyeli oldug?u gösterildi. Bu bağlamda M. communis L. yag?ının güçlü bir antioksidan etkiye sahip oldug?u, oksidatif stresten kaynaklanan apoptozisin durdurulmasında etkili oldug?u düs?ünülmektedir.

Aim: In this study, the effects of Myrtus communis L. essential oil on the human bronchial epithelial cell line (BEAS-2B) exposed to oxidative stress with hydrogen peroxide were investigated and their effects on apoptotic pathways.Materials and Methods: The MTT 3- (4,5-Dimethylthiazol-2-yl) -2,5-Diphenyltetrazolium Bromide method was used to determine the appropriate doses of hydrogen peroxide (H2O2) and M. communis L.’s essential oil in BEAS-2B cells. Oxidative stress formation was determined by measuring malondialdehyde (MDA) level. The cells were divided into three groups: the group exposed to oxidative stress (group with H2O2), the treatment group (H2O2 + M. communis L.’s essential oil) and the control group. MDA levels were measured in all three groups and expression levels of Caspase 3, Caspase 8, Caspase 9 and p21 genes were determined by RT-PCR method in order to detect apoptotic effects.Results: According to MTT test results, the appropriate doses were 40 ?M for H2O2 and 15.625 ?g/ml for M. communis L.’s essential oil. MDA levels were significantly increased in the group treated with 40 ?M H2O2 when compared with the healthy cell group (p=0.0005). In the group treated with essential oil of M. communis L., MDA level was found similar to the control group (p>0.05). Expression levels of Caspase 3, Caspase 8 and p21 genes were significantly increased in cells where H2O2 was adminisrated at 40 ?M concentrations compared to healthy cell group (p=0.001, p=0.017 and p=0.0003, respectively). However, Caspase 9 gene expression level did not change significantly (p=0.8). Compared to the group in which the oxidative stress model was established, it was found that Caspase 3 gene expression level decreased significantly in the cells treated with M. communis L.’s oil (p=0.00007).Conclusion: In our study, it was shown that the essential oil of M. communis L. strongly decreased MDA levels and also had the potential to be a therapeutic agent due to its apoptotic inhibiting effect. M. communis L. has a strong antioxidant effect and is thought to be effective in stopping apoptosis caused by oxidative stress.